收集和处理寄生虫感染的显微镜诊断样本

血液

Babesia巴贝西虫

和疟原虫一样制备厚和薄涂片

同收集Plasmodium疟原虫种。

应用Wright或Giemsa染色。

形态类似疟原虫的环状体但缺乏色素，且无配子体。出现四联体对巴贝斯虫有诊断价值，但不常见。

厚厚的血涂片可能难以解读，只能由经验丰富的显微镜师进行。

丝虫

用1mL抗凝血制作厚和薄涂片；如果第一份样本为阴性，则需采集5~10mL并通过离心或过滤进行浓集

乌切里亚班氏菌和马来布鲁贾菌的微丝蚴病：需在晚上10点和凌晨2点之间采血。

洛亚洛亚，永久双足绦虫和曼索内拉·奥扎尔迪：需在上午10点到下午6点之间采血

直接使用Giemsa或苏木精 - 伊红染色，也可在2％福尔马林（Knott技术）中浓聚后，抑或通过Nucleopore膜过滤后再染色，以获得更高的灵敏度。

Plasmodium种类

毛细血管血（如手指或耳垂，应用一次性刺血针）或5~10mL新鲜抗凝血（推荐用含EDTA的抗凝管采集）制作的厚和薄涂片

在疾病急性期采集多个样本

在采集毛细血管血或抗凝血样本后3小时内制涂片

应用Wright或Giemsa染色。

保证玻片清洁

Trypanosoma锥虫属

毛细血管血或5~6mL抗凝血的薄涂片

采集毛细血管或抗凝血。在玻片上进行涂片。

可采用多种浓集法以提高诊断敏感性。

在湿片中可见活动的锥虫; Giemsa（或Field）染色用于在固定制剂中对其进行鉴定。

骨髓、其他网状内皮组织或脑脊液

Leishmania 种类（内脏利什曼病）

骨髓、脾脏、肝脏或淋巴结抽吸物或血沉棕黄层的涂片

在玻片上进行涂片

采用吉姆萨、赖特-吉姆萨或苏木精-伊红染色。

Naegleria

Acanthamoeba

Balamuthia

新鲜脑脊液

应用无菌采集方法

尽快观察样本

应用光镜或相差显微镜观察

可通过其活动发现寄生虫；可对其固定且用Giemsa染色或培养。

Rhodesiense

Trypanosoma brucei gambiense

淋巴结或下疳的抽吸液

新鲜脑脊液

应用无菌采集方法

使用湿封片对运动寄生虫进行观测，或固定且行Giemsa或Field染色后观测，也可在离心浓集后进行。

十二指肠抽吸液或空肠活检标本

Giardia 种类

Cryptosporidium隐孢子虫属

Cystoisospora囊等孢子虫

Cyclospora环孢子虫属

微孢子虫

Strongyloides类圆线虫属

十二指肠抽吸液或空肠活检标本

立即对抽吸液进行检测，或直接固定和染色。对活检标本进行组织病理学检查。

对吸取物进行湿封，用以查找虫卵或 类圆线虫Strongyloides 幼虫。为获得最佳诊断需应用多种染色方法（具体参见下文“粪便”章节）

透射电子显微镜已成为微孢子虫检测和物种鉴定的主要方法。

直肠活检

Schistosoma mansoni

Schistosoma japonicum

对于血吸虫：距肛门9cm直肠横瓣（Houston瓣）活检样本

固定以进行组织病理学检查并用两个玻片对一个虫体节段进行压片，以提高敏感性

根据虫卵的形态确定物种

乙状结肠镜检查（直肠镜检查）

Entamoeba histolytica

用刮匙或Volkmann勺刮取新鲜组织，用外科器械剪取黏膜、或用带橡胶球的1mL吸量管从病变处获取的抽吸液（用棉拭子获取的样本不令人满意）。

在固定和染色后立即对标本进行观测。

使用湿封或固定染色玻片（如）并对玻片进行永久染色（如使用三色染剂）以检测滋养体和包囊。应测定粪便中溶组织内阿米巴的抗原或DNA；这些测试更敏感，可以区分溶组织内阿米巴和迪斯帕内阿米巴以及其他非致病性阿米巴。

粪便

Cryptosporidium隐孢子虫属

每天或隔天收集多份新鲜的粪便样本（≥ 3）

冷藏并观察新鲜的标本，或保存在福尔马林或其他固定剂中。

小心处理样本；新鲜及重铬酸钾保存的粪便样本具有传染性

十二指肠抽吸液或活检标本可用于诊断。

使用一般光学、微分干涉相差以及免疫荧光显微镜对湿封片进行观察。

用改良的抗酸或改良的红花色素染色标本。粪便抗原或DNA分析更为敏感

Cyclospora环孢子虫属

每天或隔天收集多份新鲜的粪便样本

应冷藏样本，直接检测新鲜样本或冰冻样本，或将样本保存于10％福尔马林或2.5％重铬酸钾中。 不同的实验室检测需要不同的标本留存技术。浓集法可提高检测灵敏度。

湿封并在一般光学、微分干涉相差以及紫外线荧光显微镜下进行观察。在紫外线下卵囊可自发荧光。固定标本可以用改良的抗酸染色或改良的红花色素染色。孢子形成试验可以用以鉴别孢子虫Cyclospora 和蓝绿藻。

粪便抗原或DNA检测更为特异和敏感

Cystoisospora囊等孢子虫

每天或隔天收集多份新鲜的粪便样本

检查新鲜样本，或保存在福尔马林或其他固定剂中。浓集法可提高敏感性

通过明视野微分干涉相差显微镜或落射荧光显微镜可在湿封片中查见卵囊。应用改良的抗酸染色法对固定样本进行染色。当粪便检测阴性时，检查十二指肠抽吸物或活检标本可帮助诊断。

Entamoeba dispar

Entamoeba histolytica

其他阿米巴

在上午收集多份新鲜的粪便样本（≥ 3）

未成形或腹泻的样本应在15分钟内进行观察

成形的样本可冷藏直到进行观察 保存在福尔马林或其他标本固定液中。

使用湿封和永久染色（如三色染剂）玻片；观察包囊则应用浓集法

粪便必须进行肠溶组织阿米巴特异抗原或DNA检测，该方法更加敏感而且可以鉴别肠溶组织阿米巴与非致病性的E. dispar以及其他非致病性变形虫。

Enterobius蛲虫属

通过透明胶纸在肛周收集虫卵并置于玻片上。

于上午在排便或洗澡前在肛周采集。

偶尔可在粪便样本中或由巴氏试验获得的阴道标本中查见蛲虫Enterobius虫卵。可能在肛周区域或阴道内观察到成虫。

Giardia 种类

每隔一天在上午收集多份新鲜粪便样本（(≥ 3）

直接检测新鲜标本，或用福尔马林或其他固定剂保存。 滋养体也可以在十二指肠抽吸物中检测到。

直接对标本进行检测，以及浓聚后检测。包囊常见于湿封片，滋养体则多见于固定的三色染色片。粪便抗原或DNA检测更为敏感

微孢子虫

每天或隔天收集多份粪便样本

如粪检为阴性则需进行小肠活检。

最常应用亲色方法对样本进行染色。化学荧光染料如卡尔科弗卢尔白也可用于快速检测。

电子显微镜镜检最敏感而且可以应用于物种鉴定。

某些物种可以进行粪便或组织中的DNA检测。

绦虫（带绦虫）

线虫 （蛔虫）

Ascaris

钩虫

Strongyloides

Trichuris

吸虫感染 （吸虫）

其他

每天收集多份粪便标本（Strongyloides则需收集最多7份标本）

冷藏标本，并检查新鲜，或固定在10％福尔马林中并用福尔马林 - 乙酸乙酯沉淀浓缩的标本。

可见Strongyloides的活动幼虫；可见其余肠道蠕虫的虫卵。

如果粪便在环境温度下保存,钩虫的卵可能孵化出幼虫，必须与圆线虫幼虫区分。

当疑诊类圆线虫 如果怀疑且直接检查为阴性，则应进行以下一项或多项专门的粪便检查； 福尔马林-乙酸乙酯浓缩，通过Baermann漏斗法回收幼虫，通过Haradi-Mori滤板法或琼脂平板培养。

痰或呼吸道抽吸物

Paragonimus 种类

新鲜痰液

立即观察样本或保存起来用以后续观察

可能需要浓集法有时在虫卵也存在于胸水中。

Strongyloides类圆线虫属（重叠感染）

痰液、任何抽吸物以及肺泡灌洗或引流液

立即观察样本或保存起来用以后续观察

湿封片中可发现活动的幼虫，或固定并进行Giemsa染色

肺活检

Paragonimus 种类

开放性肺活检或在透视或CT引导下经皮肺活检

采集并将样本置于装有无菌盐水的无菌容器中固定并用吉姆萨或苏木精 - 伊红染色。

可查见吸虫虫卵及成虫。

皮肤

Leishmania利什曼原虫属（皮肤利什曼病）

对病灶的非溃疡区域进行活检，并行滚片或刮擦物涂片检查。

在用Giemsa染色的滚片或涂片和用苏木精 - 伊红染色的活检标本中寻找无鞭毛体。

Leishmania 利什曼原虫的无鞭毛体在形态学上难以和 克氏锥虫Trypanosoma cruzi相鉴别。 Leishmania 利什曼原虫可以从皮肤活检样本中培养，但体外生长可能需要数周时间。可用分子检测手段查找利什曼原虫DNA。

Onchocerca volvulus

如果是在非洲感染的患者，应采集大腿、臀部、髂嵴处的皮片

对于在拉丁美洲感染的患者，则采集头部、肩胛、臀部的皮片

获取皮片时，先用酒精消毒，再将25号针插到皮下，将皮肤抬起，然后用手术刀或剃刀切下一小块皮肤组织，或应用巩膜角膜活检工具进行操作。不应出现出血检查新鲜标本，或固定在甲醇中，并用吉姆萨或苏木精 - 伊红染色。

将样本悬浮于盐水中观察从皮片中迁移出的活动微丝蚴。微丝蚴可在组织切片中查见。

泌尿生殖系统分泌物或活检

Schistosoma haematobium埃及血吸虫，偶尔为日本血吸虫S. japonicum

新鲜尿液或膀胱活检，特别是三角区周围区域

推荐的尿液采集时间：正午到下午3时之间离心分离便于检测。

在尿液标本的湿封片或膀胱活检标本中可查见虫卵。

Trichomonas毛滴虫属

用无菌拭子采集阴道、尿道、前列腺分泌物标本并置入装有少量无菌盐水的试管中

告知女性患者在采集样本前3~4天不要冲洗阴道

尽快将样本送到试验室进行检查

通过湿式贴装法鉴定活体生物是最快的。对寄生虫的直接荧光抗体检测更敏感； 培养是最敏感的，但需要3~7天。 可以进行核酸扩增试验。